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H5亚型禽流感病毒一步法RT-PCR检测方法建立

2008-02-22
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核心提示:《中国生物工程杂志》最近报道,来自中国农业科学院哈尔滨兽医研究所国家动物流感重点开放实验室和东北农业大学动物医学院的研究人员包红梅及其同事针对我国家禽中较为广泛的H5亚型AIV的HA基因建立了一种一步法RT-PCR诊断方法。

  研究学者表示,此种方法具有样品量少、特异性强、敏感性高、耗时短等特点。因此,它的建立和应用为鸟类的分子流行病学调查和对禽流感爆发初期的尽早诊断提供了有利武器。
  研究学者通过分析流感数据库221个HA序列,在保守区内用Oligo6.0软件设计并合成了一对引物,建立了用于快速诊断H5亚型禽流感病毒的一步法RT-PCR方法,其扩增的目的片段大小为372bp。通过对H5亚型禽流感病毒尿囊液和棉拭子浸出液进行不同稀释倍数检测,结果表明病毒尿囊液最低检出量为10-4稀释;阳性棉拭子最低检出量为8倍稀释。用病毒分离和该方法同时检测不同脏器、口咽及泄殖腔棉拭子样品,结果表明该方法检测灵敏度比病毒分离低10~100倍。用该方法检测H1~H15亚型禽流感病毒和鸡新城疫病毒等其他14种禽病病原,仅有H5亚型禽流感病毒扩增出特异性目的条带。
  研究人员还表示,该项研究已通过农业行业标准认证,编号为NT/T772-2004; H5亚型AIV一步法RT-PCR检测方法被农业部列入《全国监测计划(试行)》禽流感病原学监测专用诊断方法。由于该方法具有简便、易操作、易判断等特点,便于实际操作和现场应用,目前已经在我国的湖南、内蒙古、河南、广州、湖北、黑龙江、广西、湖北、海南、天津等近30个省、市、自治区以及韩国和蒙古的动物防疫监督机构推广应用,并取得良好的效果。该方法的建立为HPAI的控制和消灭提供技术支撑,发挥了依靠科技,战胜禽流感的重要作用。

(责任编辑:郎成林)

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